鼠用快速水性佐剂

 【商品名称】：鼠用快速水性佐剂

【主要成分】  纳米水性佐剂，高分子材料。

【性状】  白色透明乳液。

【作用与用途】  试剂本身是水溶性佐剂复合物，使用时不需要弗氏佐剂的复杂乳化过程，抗原和佐剂只需简单混合即可免疫动物。使用肌肉，或者皮下免疫途径。具有良好的广谱性抗体产生快，抗体滴度高，抗体亲合力高。通过减少免疫针次和降低每针次抗原用量，从而节省总抗原用量。（大大缩短了抗体生产的周期，远优于行业内标准）

【用法与用量】

1：计算所需抗原的使用量，使用无菌的生理盐水或者PBS将抗原按照终浓度2倍稀释。根据本公司以数百种抗原，疫苗，半抗原的实验数据推荐使用的抗原用量（1）绝大部分蛋白抗原每针次建议25 -50μg；（2）免疫原性较强的灭活全病毒、全细菌以及病毒样颗粒抗原每针次 15-25μg。（3）偶联了载体蛋白的小分子抗原每针次 50-80μg（一切实际用量结合公司前期数据和经验为主）

2：充分混匀佐剂（建议用针管混合反复推几次），无菌条件下取出所需用量（按每针次50μl）与抗原按体积比 1:1 迅速混匀。（本佐剂产生少许沉淀属正常现象，与抗原混合充分，尽快注射）。

3：通过皮下多点或者腹股沟多点免疫，每只小鼠注射 100μl。（注射方式结合公司常规操作即可）本佐剂与抗原混合后产生沉淀属正常现象，抽入针管前应充分混匀，抽入针管后应尽快注射。

4：第10-14天以同样的剂量同样的方式加强免疫一针（双方根据实际抗原类型定第二针天数）。备注：每次佐剂和抗原现配现用， 注射部位同初次免疫。

5：第 14 天可测到IgG ，第 21天采微量血进行 ELISA 测定，（以上为实验预测，数据结论需按照实际情况）抗体滴度可达最高峰。随后即可采全血或按常规方法进行抗原冲击免疫和脾细胞融合。

6：如果第21天效价低于预期，可在21天左右以同样的剂量和免疫方式再加强免疫 1 针。第28-35天进行效价检测，一般抗体滴度可达到峰值。随后即可采全血或按常规方法进行抗原冲击免疫和脾细胞融合。

 【贮藏与有效期】  4～8℃保存，无菌取用，保存期两年。

【生产企业】武汉美纶新材料有限公司

   相关动物实验如下表：

产品问答

Q1: 如何选择MelonAntibody系列免疫佐剂

我们水溶性的MelonAntibody系列的免疫佐剂分为:兔用水性快速免疫佐剂、鼠用水性快速免疫佐剂、羊驼水性快速免疫佐剂、山羊水性快速免疫佐剂，鸡水性快速免疫佐剂、猪水性免疫快速佐剂等各种动物。

Q2: MelonAntibody系列免疫佐剂有哪些特点？

与常规使用的弗氏佐剂相比，MelonAntibody免疫佐剂具有免疫周期短、针次少、无需乳化、抗原用量低、抗体滴度高、抗体亲合力高、易获得构象型表位的抗体等多方面优点，详述如下：
1.    MelonAntibody只需两针免疫，无论是用于单克隆还是多克隆抗体制备，与弗氏佐剂相比可减少免疫针次。
2.    MelonAntibody通过减少免疫针次和降低每针次抗原用量，从而可大大节省总抗原用量。推荐使用的抗原用量为（1）绝大部分蛋白抗原每针次建议25 -50μg；（2）免疫原性较强的灭活全病毒、全细菌以及病毒样颗粒抗原每针次 15-25μg。（3）偶联了载体蛋白的小分子抗原每针次 50-80μg（一切实际用量结合公司前期数据和经验为主）
3.    MelonAntibody抗体产生快，抗体滴度高，抗体亲合力高。以标准免疫程序为例，无论是用于单克隆还是多克隆抗体制备，只需要在三周内进行两-三针针免疫，通常在第四-五周即可获得ELISA滴度（Cutoff值为0.1000）高达1:10000-1:10000000的高亲合力抗体水平。
4.    MelonAntibody不破坏抗原天然构象，从而易于筛选获得针对构象型抗原表位的单克隆抗体，这是弗氏佐剂所不具备的一个重要特点。
5.    MelonAntibody是水溶性佐剂，使用时不需要弗氏佐剂的复杂乳化过程，抗原和佐剂只需简单混合即可免疫动物。
6.    MelonAntibody使用肌肉免疫途径，与常规小鼠单克隆抗体制备过程中使用足垫或脾内免疫相比，极大方便了使用。
7.    MelonAntibody的一个重要用途是可方便地用于制备小鼠多克隆抗体。常规多克隆抗体制备多使用兔子，不但免疫针次多、抗原用量大和抗体产生慢，而且由于技术要求较高而往往需要委托专门单位制备。使用MelonAntibody免疫佐剂，任何实验动物人员均可方便快速地制备小鼠多克隆抗体，标准免疫程序只需要简单地免疫5只小鼠，即可在五周后获得1ml高质量的小鼠多克隆抗体。（强烈推荐使用本佐剂制备小鼠多克隆抗体，1ml高质量的小鼠多克隆抗体足以满足绝大多数用户的实验需求，包括用于酶联免疫、免疫印迹、流式细胞、免疫组化和免疫沉淀等）。

Q3: 抗原溶剂

Q4: 佐剂适用物种

目前MelonAntibody免疫过：小鼠、大鼠、兔子、豚鼠、山羊、羊驼、鸡、猴子等多种物种，效果均不错。佐剂本身是多种佐剂的混合物，而不是单一佐剂。

Q5: 抗原浓度较低，能否增加佐剂用量

小鼠的免疫，我们一般建议是50ul佐剂+50ul抗原，也可以适当增加，或左右腿各一针，这样共计是100ul佐剂+100ul抗原；也可以适当降低一些佐剂的用量，佐剂里面的有效成分是富余的，根据情况可以降低20-30%一般问题不大。但是不建议抗原用量过大，比如说直接100ug以上去免疫小鼠，抗原不会得到充分利用，动物反应比较强烈，甚至死亡。

Q6: 佐剂1ml可以免疫几只小鼠

每次免疫使用佐剂量为50ul，共两次免疫，因此1ml大概可以免疫8只小鼠。标准流程：1只小鼠免疫两针，50ul佐剂+50ul抗原，共100ul免疫1针，所以一只小鼠的佐剂用量为100ul。我们佐剂1ml一管，理论可以免疫10只，但是因为使用注射器损坏，离心管粘附等影响。只能免疫大概8只左右小鼠。

Q7: 如何免疫及冲击免疫

现混现用、拿到动物房混匀，混完后10min内免疫到动物体内，时间一长，沉淀会缓慢下沉，有效成分分布不均，会对免疫效果造成影响；客户也可以在实验室先预混，到动物房后直接用枪头吹打混匀或上下摇晃混匀，不能用注射器吹打混匀，混不开。 如何免疫：美纶特色MelonAntibody水佐剂，免疫小鼠的部位是后腿根部内侧肌肉，是单点注射免疫，小鼠腿部肌肉不太多，针刺入不要太深，容易刺刀骨头； 冲击免疫方法：腹腔注射抗原20~50ug,体积在100~200ul。腹腔注射点在小鼠左侧或右侧的下腹部，避开肝脏和较低中腹部膀胱，沿腿的角度穿透腹膜。1ml注射器针头进入1/3左右，有刺空感。

Q8: 必须使用肌肉免疫么

我们佐剂有成分是后续用于人疫苗佐剂的，所有优化都是使用肌肉免疫优化，因此建议使用肌肉免疫，但是也可以使用皮下一点或二点免疫，不建议腹腔免疫。

Q9: 佐剂使用后鼓包或有流出

我们的佐剂是小鼠后腿肌肉免疫，因部分客户之前使用腹腔免疫或皮下多点免疫，做肌肉免疫生疏，会鼓包，鼓包主要原因是打到了皮下，客户可以再扎深一些。初次使用，建议用酒精棉先擦拭后腿，免疫时避开后腿内侧两个静脉血管，可以在免疫后，将针头旋转半圈，静置几秒，拔出。

Q10: 能否缩短免疫间隔时间

一般不建议缩短，因为涉及到抗体的亲和力与效价问题，但是测血清效价，我们说明书是在2免后14天，时间上可以在2免后7-10天测效价，效价达标后几款冲击免疫做融合

Q11: 能否用于真核表达的质粒或者全病毒

质粒不行，蛋白和病毒可以

Q12: 能否用于细胞或病毒等非蛋白类抗原上

我们的佐剂经过数万种抗原免疫实验，目前的抗原种类有细胞、病毒、蛋白、多肽、多糖、脂类、重金属、抗生素、农药、毒品、食品安全类化合物等的免疫，效果均很好，有丰富的工业客户案例。

Q13: 能否用于核酸质粒或RNA的免疫

核酸免疫，我们佐剂不适用，可以采用脂质体。

Q14: 能否用于疫苗研发

佐剂成分开发的最初目的是用于人用疫苗佐剂，是有成分用于疫苗研发的。考虑到客户做动物疫苗的市场成本要求，一般客户考虑用于宠物或特种动物。但是，如果您有意向合作，计划使用性价比高的水性快速佐剂让贵公司达到降本增效的目的。以我们公司对供应链上下游成本控制的能力，和GMP产线大规模的生产能力。应该可以满足您的要求。

Q15: 免疫2针后效价不理想

一般免疫原性较弱的抗原或初次使用我们产品的客户，2针后效价可能起不来，此时可以在2免后14天进行第三针免疫，一般可以有一个数量级的增长，但是最多免疫4针，4针后效价仍未起来，一般建议重新免疫或修改抗原。比较常见的是小分子抗原如多肽和小分子。多肽一般可以建议aa数量增加到20个以上，可以有效的增加抗体效价。

Q16: 虽然抗体效价达到要求，但是小鼠脾脏没有发生肿大的原因

这个正常，传统的佐剂含有卡介苗，卡介苗是强免疫原，脾脏中很多B细胞是针对卡介苗的，所以就会大一些

Q17: 佐剂的区别，如何选择，能否混用

兔子与小鼠佐剂差异大，小鼠佐剂与兔佐剂不建议混用，佐剂主要成分之一有物种选择性，小鼠佐剂本身可以混用，但是如果时间来得及，不建议混用。

Q18: 水佐剂为何比弗氏佐剂贵

单看价格略贵，但是节约时间成本 1、节省一个月的时间成本及小鼠饲养成本 2、节省抗原用量，只需要原来的1/5-1/10，天然抗原1mg售价可达上万元

Q19: 能否-20℃保存

我们佐剂成分非常稳定，做过50℃一个月测试，无影响。但是不能冻存，冻存对免疫效果会有较大影响。一般保存可以放在4℃冰箱靠门的一次，不放在最里面，部分冰箱温控不好，放到最里面温度低于0℃.

Q20: 弗氏佐剂免疫一针后，后续可否用快速佐剂

可以的，不同佐剂的功能是类似的，不同佐剂可以尝试交叉使用

Q21: 能否与铝佐剂平行使用

可以结合使用，任何免疫方式都可以产生细胞免疫与体液免疫的效果。

Q22: 冲击免疫的时候能否用免疫原加我们的快速佐剂来免疫，他的免疫原是细胞，不是经过处理的蛋白

冲击免疫的主要作用是可以较高程度的激活脾细胞，对融合后杂交瘤细胞分泌抗体的能力有很大影响，还是会建议直接抗原冲击免疫。而且本身细胞作为免疫原大概率会存在效价低的问题，成分比较杂，目的表位蛋白不一定是优势免疫原。之前严总说接过类似的细胞免疫制备抗体的技术服务基本无法达到实验预期。

Q23: 抗体制备配液使用过程中，佐剂是否还需要与抗原中多肽共价键反应形成配液吗？

水性快速佐剂在抗体制备中和抗原混合配制免疫的工艺中，通常不需要与抗原中的多肽形成共价键反应。其作用机制主要是：佐剂中的高分子聚合物分子疏水端与蛋白质抗原（含蛋白偶联的多肽或小分子化合物）通过非共价键结合，如疏水相互作用、氢键、范德华力等，形成一种复合物。这种结合方式可以保持蛋白结构不受影响，注射到动物体内后，佐剂能将结合的抗原缓慢释放，从而达到逐步刺激免疫系统的效果。

Q24: 佐剂适用物种

目前MelonAntibody免疫过：小鼠、大鼠、兔子、豚鼠、山羊、羊驼、鸡、猴子等多种物种，效果均不错。佐剂本身是多种佐剂的混合物，而不是单一佐剂。