MelonAntibody系列免疫水性佐剂客户端常见问题汇总

产品问答

Q1: 如何选择MelonAntibody系列免疫佐剂？

 

我们水溶性的MelonAntibody系列的免疫佐剂分为:兔用水性快速免疫佐剂、鼠用水性快速免疫佐剂、羊驼水性快速免疫佐剂、山羊水性快速免疫佐剂，鸡水性快速免疫佐剂、猪水性免疫快速佐剂等各种动物。
 

Q2: MelonAntibody系列免疫佐剂有哪些特点？

 

与常规使用的弗氏佐剂相比，MelonAntibody免疫佐剂具有免疫周期短、针次少、无需乳化、抗原用量低、抗体滴度高、抗体亲合力高、易获得构象型表位的抗体等多方面优点，详述如下：
1.    MelonAntibody只需两-三针免疫，无论是用于单克隆还是多克隆抗体制备，与弗氏佐剂相比可减少免疫针次。
2.    MelonAntibody通过减少免疫针次和降低每针次抗原用量，从而可大大节省总抗原用量。推荐使用的抗原用量为（1）免疫原性较弱的亚单位蛋白抗原每针次100μg；（2）免疫原性较强的灭活全病毒或全细菌以及病毒样颗粒抗原每针次20μg。（3）偶联了载体蛋白的小分子抗原每针次建议100μg（一切实际用量结合公司前期数据和经验为主）

3.    MelonAntibody抗体产生快，抗体滴度高，抗体亲合力高。以标准免疫程序为例，无论是用于单克隆还是多克隆抗体制备，只需要在三周内进行两-三针免疫，通常在第三-四周即可获得ELISA滴度（Cutoff值为0.1000）高达1:10000-1:10000000的高亲合力抗体水平。
4.    MelonAntibody不破坏抗原天然构象，从而易于筛选获得针对构象型抗原表位的单克隆抗体，这是弗氏佐剂所不具备的一个重要特点。
5.    MelonAntibody是水溶性佐剂，使用时不需要弗氏佐剂的复杂乳化过程，抗原和佐剂只需简单混合即可免疫动物。
6.    MelonAntibody使用肌肉免疫途径，与常规兔子单克隆抗体制备过程中使用足垫或脾内免疫相比，极大方便了使用。
 

 

Q3: 大体积兔子免疫是否增加剂量

不需要。

 

Q4:抗原溶剂

溶剂	能否使用
PBS、生理盐水	可以
含有尿素	没有影响，客户反馈最高尿素可以高达6M以上
含有盐酸胍	没有影响
含有咪唑	没有影响，但是建议用PBS透析后再去免疫

 

 

 

Q5: 如何免疫及冲击免疫

 

现混现用、拿到动物房混匀，混完后10min内免疫到动物体内，时间一长，沉淀会缓慢下沉，有效成分分布不均，会对免疫效果造成影响；客户也可以在实验室先预混，到动物房后直接用枪头吹打混匀或上下摇晃混匀，不能用注射器吹打混匀，混不开。 如何免疫：美纶特色MelonAntibody水佐剂，免疫小鼠的部位是后腿根部内侧肌肉，是单点注射免疫，小鼠腿部肌肉不太多，针刺入不要太深，容易刺刀骨头； 冲击免疫方法：腹腔注射抗原20~50ug,体积在100~200ul。腹腔注射点在小鼠左侧或右侧的下腹部，避开肝脏和较低中腹部膀胱，沿腿的角度穿透腹膜。1ml注射器针头进入1/3左右，有刺空感。

 

Q6: 必须使用肌肉免疫么

 

我们佐剂有成分是后续用于人疫苗佐剂的，所有优化都是使用肌肉免疫优化，因此建议使用肌肉免疫，但是也可以使用皮下一点或二点免疫，不建议腹腔免疫。

 

 

Q7: 佐剂使用后鼓包或有流出

 

我们的佐剂是后退肌肉免疫，因部分客户之前使用腹腔免疫或皮下多点免疫，做肌肉免疫生疏，会鼓包，鼓包主要原因是打到了皮下，客户可以再扎深一些。初次使用，建议用酒精棉先擦拭后腿，免疫时避开后腿内侧两个静脉血管，可以在免疫后，将针头旋转半圈，静置几秒，拔出

 

Q8: 能否缩短免疫间隔时间

 

一般不建议缩短，因为涉及到抗体的亲和力与效价问题，但是测血清效价，我们说明书是在2免后14天，时间上可以在2免后7-10天测效价，效价达标后几款冲击免疫做融合

 

Q9: 能否用于真核表达的质粒或者全病毒

 

质粒不行，蛋白和病毒可以

 

Q10: 能否用于细胞或病毒等非蛋白类抗原上

 

我们的佐剂经过数万种抗原免疫实验，目前的抗原种类有细胞、病毒、蛋白、多肽、多糖、脂类、重金属、抗生素、农药、毒品、食品安全类化合物等的免疫，效果均很好，有丰富的工业客户案例。

 

Q11: 能否用于核酸质粒或RNA的免疫

 

核酸免疫，我们佐剂不适用，可以采用脂质体

 

Q12: 能否用于疫苗研发

 

佐剂成分开发的最初目的是用于人用疫苗佐剂，是有成分用于疫苗研发的。考虑到客户做动物疫苗的市场成本要求，一般客户考虑用于宠物或特种动物。但是，如果您有意向合作，计划使用性价比高的水性快速佐剂让贵公司达到降本增效的目的。以我们公司对供应链上下游成本控制的能力，和GMP产线大规模的生产能力。应该可以满足您的要求。

 

Q13: 免疫2针后效价不理想

 

一般免疫原性较弱的抗原或初次使用我们产品的客户，2针后效价可能起不来，此时可以在2免后14天进行第三针免疫，一般可以有一个数量级的增长，但是最多免疫4针，4针后效价仍未起来，一般建议重新免疫或修改抗原。比较常见的是小分子抗原如多肽和小分子。多肽一般可以建议aa数量增加到20个以上，可以有效的增加抗体效价。

 

 

Q14: 能否-20℃保存

 

我们佐剂成分非常稳定，做过50℃一个月测试，无影响。但是不能冻存，冻存对免疫效果会有较大影响。一般保存可以放在4℃冰箱靠门的一次，不放在最里面，部分冰箱温控不好，放到最里面温度低于0℃.

 

Q15: 兔8w佐剂免疫一只兔子的抗体产量

 

我们这边兔多抗项目，有两种纯化方式： （1）抗原亲和纯化 一般纯化10ml抗血清能获得1~3mg纯化后抗体，一只兔子能取50ml抗血清，这样总量应该在5~15mg左右； （2）ProiIenA/G纯化 纯化20ml抗血清应该能拿到100~150mg左右纯化后抗体。 一般客户采用抗原亲和纯化的多一些，以前一个数据为主。（ps:这些是弗式佐剂免疫的结果）

 

Q16: 弗氏佐剂免疫一针后，后续可否用快速佐剂

 

可以的，不同佐剂的功能是类似的，不同佐剂可以尝试交叉使用

 

Q17: 能否与铝佐剂平行使用

 

可以结合使用，任何免疫方式都可以产生细胞免疫与体液免疫的效果。

 

Q18: 佐剂适用物种

 

目前MelonAntibody免疫过：小鼠、大鼠、兔子、豚鼠、山羊、羊驼、鸡、猴子等多种物种，效果均不错。佐剂本身是多种佐剂的混合物，而不是单一佐剂。

 

Q19: 水佐剂为何比弗氏佐剂贵

 

单看价格略贵，但是节约时间成本 1、节省一个月的时间成本及小鼠饲养成本 2、节省抗原用量，只需要原来的1/5-1/10，天然抗原1mg售价可达上万元

 

 

Q20: 冲击免疫的时候能否用免疫原加我们的快速佐剂来免疫，他的免疫原是细胞，不是经过处理的蛋白

 

冲击免疫的主要作用是可以较高程度的激活脾细胞，对融合后杂交瘤细胞分泌抗体的能力有很大影响，还是会建议直接抗原冲击免疫。而且本身细胞作为免疫原大概率会存在效价低的问题，成分比较杂，目的表位蛋白不一定是优势免疫原。之前严总说接过类似的细胞免疫制备抗体的技术服务基本无法达到实验预期。

 

Q21: 对兔子的体重是否有要求

 

对体重没有要求，目前我公司免疫兔子时采用的是健康的6周大小的新西兰大白兔（双眼有神，屁股干净，约2Kg）。

 

Q22: 抗体制备配液使用过程中，佐剂是否还需要与抗原中多肽共价键反应形成配液吗？

 

水性快速佐剂在抗体制备中和抗原混合配制免疫的工艺中，通常不需要与抗原中的多肽形成共价键反应。其作用机制主要是：佐剂中的高分子聚合物分子疏水端与蛋白质抗原（含蛋白偶联的多肽或小分子化合物）通过非共价键结合，如疏水相互作用、氢键、范德华力等，形成一种复合物。这种结合方式可以保持蛋白结构不受影响，注射到动物体内后，佐剂能将结合的抗原缓慢释放，从而达到逐步刺激免疫系统的效果。

 

Q23: 佐剂适用物种

 

目前MelonAntibody免疫过：小鼠、大鼠、兔子、豚鼠、山羊、羊驼、鸡、猴子等多种物种，效果均不错。佐剂本身是多种佐剂的混合物，而不是单一佐剂。

物种	佐剂类型	抗原用量ug	抗原体积ul	佐剂体积ul
小鼠	MelonAntibody-Mouse	5~40ug	50	50
大鼠、豚鼠	MelonAntibody-Mouse	20~50ug	70	70
兔子、鸡	MelonAntibody-Rabbit	50~100ug	100	100
山羊、羊驼	MelonAntibody-goat MelonAntibody-alpaca	200~500ug	300~500	300~500
猴子	MelonAntibody-monkey	200ug	200~300	200~300